紫外凝膠成像儀是一種實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,主要用于生物醫(yī)學(xué)和醫(yī)藥領(lǐng)域,對(duì)蛋白質(zhì)和核酸凝膠進(jìn)行成像和分析。它提供的功能包括分子量定量、密度定量、密度掃描、PCR定量等。具體介紹如下:
1.分子量定量:通過(guò)對(duì)DNAMarker條帶的已知分子量進(jìn)行注釋,自動(dòng)生成擬合曲線,進(jìn)而準(zhǔn)確衡量未知條帶的分子量。
2.密度定量:在測(cè)定DNA和RNA濃度時(shí),先對(duì)標(biāo)準(zhǔn)條帶進(jìn)行密度標(biāo)定,然后比較未知條帶的密度,從而得到其含量。
3.密度掃描:用于計(jì)算蛋白表達(dá)產(chǎn)物在菌體蛋白中的百分比含量,較傳統(tǒng)方法更簡(jiǎn)便。
4.PCR定量:計(jì)算PCR實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增出來(lái)的不同條帶相對(duì)于總體條帶的百分?jǐn)?shù)。
紫外凝膠成像儀的正確使用過(guò)程包括準(zhǔn)備階段、操作步驟和圖像獲取與分析等。具體介紹如下: 1.準(zhǔn)備階段
工作環(huán)境要求:儀器應(yīng)放置在室溫15-30℃,相對(duì)濕度不大于80%的環(huán)境中工作。工作臺(tái)應(yīng)平坦、牢固,無(wú)振動(dòng)或其他影響儀器正常工作的現(xiàn)象。
樣品準(zhǔn)備:將電泳后的瓊脂糖凝膠置于拍攝面板上。確保凝膠沒(méi)有氣泡,位置正確。
2.操作步驟
開機(jī):先打開凝膠成像系統(tǒng),再開電腦并進(jìn)入軟件。
放置凝膠并調(diào)整參數(shù):把電泳后的凝膠樣品放在紫外凝膠成像儀上,設(shè)置成像參數(shù)如波長(zhǎng)、照度和曝光時(shí)間等。
拍攝圖像:打開UV1鍵,進(jìn)行自動(dòng)預(yù)覽及捕獲圖像,點(diǎn)擊拍照鍵完成拍攝。
3.圖像獲取與分析
啟動(dòng)成像程序:記錄圖像后,可利用系統(tǒng)自帶的圖像捕捉和分析軟件對(duì)拍攝的圖像進(jìn)行處理和分析。
圖像處理:通過(guò)軟件對(duì)圖像進(jìn)行剪輯、標(biāo)記,自動(dòng)尋找凝膠條帶,并與標(biāo)準(zhǔn)條帶比較計(jì)算分子量或密度。
數(shù)據(jù)輸出:詳細(xì)的分析結(jié)果可以輸出成Excel格式,便于進(jìn)一步編輯和分析。
4.維護(hù)保養(yǎng)
清潔:定期清理儀器表面和拍照面板,保持紫外燈箱及投影白光板的清潔。
檢查:每次使用后檢查數(shù)據(jù)線連接是否正常,軟件功能是否完好。
注意事項(xiàng):避免用力推動(dòng)關(guān)閉暗箱門,以保護(hù)機(jī)械結(jié)構(gòu)。
5.使用注意事項(xiàng)
防止污染:不要用被污染的手套接觸凝膠成像系統(tǒng)的部件,避免EB污染。
光源使用:在使用紫外光源期間,切勿打開凝膠成像儀的前面板,以防紫外線傷害。
穩(wěn)壓電源:使用穩(wěn)壓電源,確保儀器穩(wěn)定運(yùn)行。